Тема: Биотико – микробиологические методы исследования воды и анализа результатов в экологии
Цель: ознакомиться с некоторыми методами биотико - микробиологического исследования ианализа полученных результатов в экологии.
Задачи:
1. провести исследование микробного пейзажа пробы воды, донных осадков, почвы и растений и дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам клеточной стенки (окраска по Граму);
2. сделайте оценку и проведите письменный анализ полученных результатов.
Задание:
1.Подробно ознакомьтесь с теоретической частью работы и запишите методы в методическую тетрадь, также сделайте лабораторно - практическую работу и результаты опишите в исследовательской тетради;
· исследовать микробный пейзаж пробыводы, раствора донных осадков, почвы и растений, также зарисовать морфологию бактерий и описать их;
· провести окрашивание мазков пробы воды, раствора донных осадков и почвы по Граму для определения дифференцирования имеющихся бактерий по биохимическим свойствам их клеточной стенки.
· На основании полученных данных напишите доклад и тезис доклада, также сделайте практические предложения по улучшению экологической ситуации.
Часть 1. Теоретическая часть
Биохимические свойства клеточной стенки бактерий
Микрофлора (Микро- + Флора, син.: бактериологический пейзаж, микробный пейзаж, флора микробная), сложившаяся в процессе эволюции устойчивая совокупность различных видов микроорганизмов, характерная для данного вида животного или растения, для определенной экологической ниши;
Микробный пейзаж совокупность видов микроорганизмов, обнаруженных в пробе .
Биохимические свойства клеточной стенки бактерий выявляют с помощью окраски по Граму. Отношение к окраске по Граму – важный для систематики признак бактерий, который зависит от структуры и химического состава клеточной стенки бактерий. Выделяют две большие группы - грамположительные (“грам+”) и грамотрицательные (“грам-“) бактерии.
Отличия ГР(+) и ГР(-) бактерий. Стенка грамположительных бактерий после окраски по Граму сохраняет комплекс йода с генциановым фиолетовым (окрашены в сине-фиолетовый цвет), грамотрицательные бактерии теряют этот комплекс и соответствующий цвет после обработки и окрашены в розовый цвет за счет докрашивания фуксином.
Особенности клеточной стенки грамположительных бактерий.Мощная, толстая, несложно организованная клеточная стенка, в составе которой преобладают пептидогликан и тейхоевые кислоты, нет липополисахаридов (ЛПС), часто нет диаминопимелиновой кислоты.
Особенности клеточной стенки грамотрицательных бактерий.Клеточная стенка значительно тоньше, чем у грамположительных бактерий, содержит ЛПС, липопротеины, фосфолипиды, диаминопимелиновую кислоту. Устроена более сложно - имеется внешняя мембрана, поэтому клеточная стенка трехслойная.
Методика приготовление красящих растворов
Раствор кристаллического фиолетового по Эрлиху: 1,2 г кристаллического фиолетового растворяют в 12 мл 96 % спирта и добавляют 100 мл свежеприготовленной анилиновой воды, полученной при смешивании 2 мл анилина со 100 мл воды. Эта красящая смесь может храниться 2 нед. Вместо кристаллического фиолетового можно использовать метиловый фиолетовый.
Красящие смеси для грамположительных бактерий:
1) 10 г кристаллического фиолетового + 100 мл спирта;